کلونينگ ژن کدکننده آنتی‌ژن سطحی ويروس هپاتيت B در اشرشياکولی

شريفی, زهره and ياری, فاطمه and سميعی, شهرام and محموديان شوشتری, محمود (2007) کلونينگ ژن کدکننده آنتی‌ژن سطحی ويروس هپاتيت B در اشرشياکولی. مجله علوم پزشکی رازی, 14 (56). pp. 109-116. ISSN 2228-7051

Preview

Text RJMS-v14n56p109-fa.pdf Download (297kB) | Preview

Abstract

زمينه و هدف: عفونت ويروس هپاتيت B در سراسر جهان آندميک است. حدود 350 ميليون ناقل ويروس هپاتيت B در جهان وجود دارد. حدود يک ميليون نفر در سال به دنبال عفونت ويروس هپاتيت B تلف می‌شوند. متاسفانه دارويی که بتواند به درمان کامل هپاتيت B بيانجامد، وجود ندارد و تنها راه جهت کنترل اپيدمی‌ها، انجام واکسيناسيون می‌باشد. اندازه‌گيری مقدار DNA ويروسی برای شناسايی افرادی که دارای عفونت مزمن هستند، مورد استفاده قرار می‌گيرد، همچنين برای بررسی و پيش‌بينی سير درمان بيماری و تاثير داروهای ضد ويروسی در رژيم‌های درمانی کاربرد دارد. با معرفی Real-time PCR در آزمايشگاه‌های تشخيص طبی، اندازه‌گيری کمی DNA ويروس در نمونه‌های بالينی به طور معنی‌داری توسعه پيدا کرده است. هدف از اين مطالعه، کلونينگ و شناسايی ژن کدکننده آنتی‌ژن سطحی ويروس هپاتيت B به عنوان استاندارد خارجی است. روش بررسی: اين تحقيق يک مطالعه توصيفی می‌باشد. برای تکثير ژن S، ابتدا ژنوم ويروس از نمونه سرم که از نظر HbsAg(Hepatitis B surface Antigen) مثبت بود، استخراج شد. سپس با استفاده از پرايمرهای اختصاصی، قطعه‌ای از ژن S با روش PCR(Polymerase chain reaction) تکثير شد. برای کلونينگ ژن S از يک کلونينگ وکتور pTZ-57R(فرمنتاس) استفاده گرديد. پس از خالص‌سازی، محصول PCR به داخل وکتور پلاسميدی کلون شد و به داخل سلول مستعد E.Coli سويه TG1، ترانسفورم شد. باکتری حاوی پلاسميد نوترکيب با روشهای مختلف از قبيل مقاومت به آنتی‌بيوتيک، PCR، برش با آنزيم‌های اختصاصی و در نهايت تعيين توالی، مورد بررسی قرار گرفت. برای آناليز آماری، از آزمون t و محاسبه ميانگين تعداد کلنی‌های شمارش شده بر روی پليت‌های حاوی آنتی‌بيوتيک و بدون آن، استفاده گرديد. يافته‌ها: پس از استخراج DNA ويروسی با استفاده از آغازگرهای اختصاصی، ژن S با روش PCR تکثير شد و قطعه‌ای شامل 175 جفت باز حاصل گرديد، سپس ژن S با استفاده از پلاسميد pTZ57R کلون گرديد. پلاسميد نوترکيب استخراج شد و با روش PCR و برش آنزيمی، مورد تاييد قرار گرفت. برای تاييد نهايی، پلاسميد نوترکيب تعيين توالی شد. نتيجه‌گيری: نتايج حاصل از اين مطالعه نشان می‌دهد که قطعه 175 جفت‌بازی ژن S در پلاسميد pTZ57R کلون گرديده است که می‌توان از آن، جهت تهيه استاندارد Real-time PCR يا کنترل مثبت در آزمايش‌ها استفاده نمود.

Item Type:	Article
Uncontrolled Keywords:	کلونينگ، استاندارد خارجی، اشرشياکولی، آنتی‌ژن سطحی ويروس هپاتيت B
Subjects:	R Medicine > R Medicine (General)
Divisions:	Other Journal > Razi Journal of Medical Sciences
Depositing User:	Touba Derakhshande
Date Deposited:	27 Nov 2014 14:26
Last Modified:	27 Nov 2014 14:26
URI:	http://eprints.bpums.ac.ir/id/eprint/1808

Actions (login required)

View Item