استخراج و بهينه‌سازی تخليص چند مرحله‌ای آنزيم تبديل کننده آنژيوتانسين I(ACE) از ريه خرگوش

شفيعی, سید محمد and کيهانی, میهندخت and شعبانی, محمد and کوچکی شلمانی, اسماعیل and کاويانی, مهرانگیز (2005) استخراج و بهينه‌سازی تخليص چند مرحله‌ای آنزيم تبديل کننده آنژيوتانسين I(ACE) از ريه خرگوش. مجله علوم پزشکی رازی, 11 (44). pp. 979-985. ISSN 2228-7051

Preview

Text RJMS-v11n44p979-fa.pdf Download (403kB) | Preview

Abstract

آنزيم تبديل کننده آنژيوتانسين I(ACE) يک پپتيديل دی پپتيد هيدرولاز است که 2 اسيد آمينه انتهای کربوکسيلی(His-Leu) را از آنژيوتانسين I که يک دکاپپتيد است جدا کرده و آنژيوتانسين II(يک اکتاپپتيد) را توليد می‌نمايد. به علت اهميت ACE و مهارکننده‌های آن در بيماری‌زايی و درمان بيماری‌های قلبی عروقی مانند فشار خون بالا و نارسايی قلبی، تخليص و سنجش آن علاوه بر ارزش علمی دارای اهميت‌ بالينی و تجاری می‌باشد. با توجه به اين مطلب، در مطالعه حاضر ACE از بافت ريه خرگوش به عنوان منبــع غنـی از ACE در 3 مرحله خالص گرديد. برای استخراج ACE، پس از عمل هموژن کردن، از دترژنت غيريونی 40P-Nonidet استفاده شد سپس محلول استخراج شــده از دترژنــت، تحــت عمل رسوب‌دهی با سولفات آمونيوم با غلظت‌های اشباعی 50% و 70% قرار گرفــت. در مرحلــه بعــد محلول رويی به دست آمده توسط تبادل يونی با Q-Sepharose HP کروماتوگرافی شد سپس نمونه‌های دارای حداکثر فعاليت مخصوص آنزيم، توسط 200Sepharryl HR S تحت کروماتوگرافی ژل فيلتراسيون قرار گرفتند. پس از اين مرحله خالص بودن آنزيم با SDS-PAGE و PAGE تاييد شد و وزن مولکولی آن 175 کيلودالتون تعيين گرديد. فعاليت مخصوص نهايی به دست آمده برای ACE، 1/39 واحد در ميلی‌گرم بود که به دنبال 651 برابر خالص‌کردن حاصل شده بود و بازده نهايی فرآيند تخليص، 2/5% مشاهده شد. پس از تخليص آنزيم، Km(michaelis constant) آن برای سوبسترای HHL(هيپوريل ـ هيستيديل ـ لوسين)، 17/2 ميلی‌مول محاسبه شد. مهار کننــده رقابتــی کاپتوپريــل توانست در غلظت‌های 1/0 تا 001/0 ميلی مولار تقريباً ACE را به طور کامل مهار کنــد. PH اپتيمم برای ACE 3/8 محاسبه گرديد. هم‌چنين بررسی اثر تغييرات دمايی، کاهش شديــد در فعاليت آنزيم را در دمای بالاتر از 37 درجه سانتی‌گراد نشان داد. کاهش مراحل تخليص و مــدت زمان لازم برای آن و نيز بازده مناسب به دست آمده، نتيجـه استفاده از رزين‌های با قدرت تفکيــک بهتـر و به کار گيـری سيستم FPLC(Fast Protein Liquid Chromatography) بود که در نهايت موجب بهبود و کاهش زمان فرآيند تخليص چند مرحله‌ای ACE گرديد.

Item Type:	Article
Uncontrolled Keywords:	آنزيم تبديل کننده آنژيوتانسين، تخليص چند مرحله‌ای، کروماتوگرافی، ريه،
Subjects:	R Medicine > R Medicine (General)
Divisions:	Other Journals > Razi Journal of Medical Sciences
Depositing User:	Touba Derakhshande
Date Deposited:	17 Dec 2014 11:35
Last Modified:	17 Dec 2014 11:35
URI:	http://eprints.bpums.ac.ir/id/eprint/2258

Actions (login required)

View Item