توليد هورمون رشد انسانی نوترکيب توسط سلول تخمدان هامستر چينی و بررسی فعاليت زيستی آن به روش سنجش گزارشگر ژنی

رضائی, مرضیه and زرکش اصفهانی, سید حمید (2013) توليد هورمون رشد انسانی نوترکيب توسط سلول تخمدان هامستر چينی و بررسی فعاليت زيستی آن به روش سنجش گزارشگر ژنی. مجله علوم پزشکی رازی, 19 (104). pp. 1-9. ISSN 2228-7051

Text RJMS-v19n104p1-fa.pdf Download (377kB)

Abstract

زمينه و هدف: سلول‎های کشت شده پستانداران به خاطر تواناييشان در ايجاد ساختار صحيح پروتئين، تجمع و اصلاحات پس از ترجمه‎ای، سيستم مطلوبی برای توليد پروتئين‎های نوترکيب با کاربردهای کلينيکی هستند، بنابراين زمانی که يک پروتئين در سلول‎های پستانداران بيان ‎شود در مقايسه با ساير ميزبان‎ها از جمله باکتری‎ها،کيفيت واثر بهتری، دارد. سيستم‌های گزارشگر ژنتيکی ((Gene reporter systems به عنوان ابزاری برای مطالعه‌ تنظيم و بيان ژن‌ها در سلول‌های يوکاريوتی Eukaryotic) ( می‌باشند. ژن‌های گزارشگر دارای کاربردهای ويژه‌ای هستند و اغلب به عنوان شاخصی برای فعاليت رونويسي در سلول‌ها به کار می‌روند. روش­ کار: در اين پژوهش تجربی ابتدا هورمون رشد انسانی نوترکيب (rhGH= recombinant human Growth Hormone) توسط يک کلون پايدار از سلول‌‌های CHO نوترکيب (recombinant Chinese Hamster Ovary) توليد و با روش‌هايي مانند اليزا(ELISA = Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay) و وسترن بلات(Western blotting)توليد آن اثبات گرديد. سپس فعاليت زيستی هر دو نوع rhGH يوکاريوت و نوع تجاری به روش سيستم گزارشگر ژني (سيستم گزارشگر LHRE-TK-Luc) بررسی و بايکديگر مقايسه شدند. اين سيستم شامل LHRE (Lactogenic Hormone Responsive Element)، پروموتور TK (Thymidine Kinase promoter) و ژن تحت کنترل آن، Luc کدکننده برای آنزيم فايرفلای لوسيفراز (Firefly luciferase) می‌باشد و امکان بررسی و اندازه‌گيری انتقال پيام ايجاد شده توسط GH در سلول‌های ترانسفورم شده با ژن GHR را فراهم می‌کند. برای اين منظور از سلول‌های HEK293 Human Embryonic Kidney 293 cells ترانسفکت شده با گيرنده هورمون رشد استفاده شد و فرايند انتقال پيام درون سلولی القا شده توسط rhGH و در نتيجه بيان آنزيم لوسيفراز و به دنبال آن توليد نور توسط دستگاه لومينومتر اندازه‎گيری شد. يافته­ها: نتايج اوليه نشان دادند که ميزبان نوترکيب (rCHO) به خوبی توليد کننده rhGH می باشد. از طرفی نتايج حاصل از سيستم بررسی فعاليت زيستی نشان دادند که rhGH يوکاريوت به خوبی فرايند سيگنالينگ درون سلولی را القا می‌کند و حتی در مقايسه با نوع تجاري موجود، نوع يوکاريوت دارای فعاليت زيستی بهتری می‌باشد. نتيجه­گيری: سلول های کشت شده پستانداران ميزبان های بسيار مناسب و ايمني برای توليد پروتئين های نوترکيب با کاربردهای کلينيکی می باشند. روش سيستم گزارشگر ژنی (Gene reporter assay) يک روش بسيار حساس، کارا، دقيق و ايمن برای بررسی فعاليت زيستی پروتئين های نوترکيب مي باشد.

Item Type:	Article
Uncontrolled Keywords:	سلول تخمدان هامستر چینی، هورمون رشد انسانی نوترکیب، سنجش زیستی، سیستم گزارشگر ژن، الیزا
Subjects:	R Medicine > R Medicine (General)
Divisions:	Other Journal > Razi Journal of Medical Sciences
Depositing User:	Touba Derakhshande
Date Deposited:	30 Aug 2014 08:38
Last Modified:	30 Aug 2014 08:38
URI:	http://eprints.bpums.ac.ir/id/eprint/745

Actions (login required)

View Item